Resumen
Antecedentes
Investigaciones anteriores han demostrado un aumento notable en los recuentos de neutrófilos entre pacientes pediátricos con bronquitis plástica (PB) asociada con la neumonía de la micoplasma pneumoniae (MPP). Sin embargo, el papel de los neutrófilos en PB asociado a MPP sigue siendo en gran medida difícil.
Métodos
Este es un estudio de casos de casos anidados que matriculó a pacientes diagnosticados con MPP que se sometieron a broncoscopia en nuestro departamento durante la pandemia de MPP desde septiembre de 2023 hasta enero de 2024. Realizamos un análisis de características clínicas, muestras de sangre, broncoalveolar fluido (BALF) y especímenes, correlacionando estos factores con el desarrollo y los externos de la PB.
Resultados
Entre los 557 pacientes con MPP incluidos en el estudio, 21 (3.8%) desarrollaron Pb. El recuento de neutrófilos periféricos se identificó como un factor de riesgo independiente para Pb (OR = 3.113 (IC 95%1.050–9.224), P = 0.04) y exhibió un valor predictivo fuerte para la condición (AUC = 0.885 (IC 95%0.796-0.975), P <0.001). En particular, hubo una marcada presencia de infiltración de neutrófilos y formación de trampas extracelulares de neutrófilos (NET) en las muestras de sangre, BALF y fundición de pacientes con PB. Además, los niveles de neutrófilos y redes se correlacionaron significativamente con los resultados clínicos.
Conclusión
Un alto nivel de neutrófilos presenta un riesgo de PB y demuestra un valor predictivo fuerte para su diagnóstico. Los neutrófilos y las redes están estrechamente relacionados con los resultados clínicos de PB en pacientes con MPP.
Introducción
Mycoplasma pneumoniae neumonía (MPP) es una forma frecuente de neumonía adquirida en la comunidad, particularmente entre los niños. A partir de mediados de septiembre de 2023, hemos sido testigos de un aumento notable en los casos de MPP, que ha ejercido una tensión considerable en varios departamentos de emergencias pediátricas (1,2,3). Incluso con la administración de antibióticos adecuados, algunos casos de micoplasma pneumoniae pueden aumentar a un estado refractario, que presenta una variedad de complicaciones graves. Estos incluyen neumonía necrotizante (4), bronquiolitis obliterante (5) y bronquitis plástica (PB) (4, 6, 7). PB es una condición rara pero potencialmente mortal caracterizada por la formación de yesos gelatinosos, en forma de árbol, que pueden conducir a una obstrucción respiratoria severa (8). El diagnóstico de PB se establece típicamente a través de un historial de esputo expectorativo con un patrón de ramificación o la extracción directa de tales fundiciones durante la broncoscopia (9). Sin embargo, las causas subyacentes de PB en el contexto de MPP siguen siendo poco conocidas.
Estudios anteriores han sugerido un posible vínculo con la inflamación del sistema inmune, ya sea localmente o en todo el cuerpo. En pacientes con MPP, el grupo PB exhibió niveles más altos de neutrófilos en comparación con el grupo no PB, que se identificó como un factor de riesgo significativo para PB (4, 7). Sin embargo, estos estudios están limitados por la ausencia de evidencia patológica, y la contribución de los neutrófilos a la patogénesis de PB sigue sin estar clara. Nuestros resultados de secuenciación de transcriptoma previo del líquido de lavado broncoalveolar (BALF) y la sangre de pacientes con MPP sugieren que las trampas extracelulares de neutrófilos (NET) pueden desempeñar un papel importante en el MPP (10, 11). Los neutrófilos, las células inmunes más prevalentes en el torrente sanguíneo, son capaces de liberar NET que pueden detectarse mediante ADN, mieloperoxidasa (MPO) e histona citrulada 3 (Cith3). Las redes poseen propiedades antimicrobianas, pero también se han asociado con procesos inflamatorios (12). Sin embargo, la asociación entre redes y PB aún no se ha establecido en la literatura.
En consecuencia, realizamos un estudio de control de casos anidados dentro de una cohorte de pacientes con MPP sometidos a broncoscopia, que comprende 21 pares de niños coincidentes con y sin PB. El objetivo era analizar sus muestras biológicas e investigar el papel de los neutrófilos en el desarrollo y los resultados de PB asociado al MPP.
Métodos
Población de estudio
Entre septiembre de 2023 y enero de 2024, los pacientes hospitalizados en el Departamento de Medicina Respiratoria en el Hospital de Niños de la Universidad de Medicina de Nanjing se inscribieron en la cohorte de MPP para el estudio. La investigación se realizó de acuerdo con los principios de la Declaración de Helsinki y recibió la aprobación del Comité de Ética del Hospital de Niños de la Universidad de Medicina de Nanjing (número de aprobación: 202308005-1). El consentimiento informado se obtuvo de los pacientes o sus guardianes.
Los criterios de inclusión incluyeron: (1) rango de edad de 28 días a 15 años; (2) presencia de fiebre u otros síntomas respiratorios; (3) confirmación radiográfica de neumonía; (4) Hallazgos serológicos positivos, incluidos los niveles elevados de la inmunoglobulina M micoplasma sérica (MP) de la inmunoglobulina M (IGM) o evidencia de seroconversión en muestras de suero emparejadas, junto con resultados positivos de los ensayos de reacción de reacción de la polimerasa MPP realizados en los aspirados nasofaringeos; (5) Someterse al tratamiento con broncoscopia.
Los criterios de exclusión incluyeron: (1) pacientes con displasia broncopulmonar preexistente, enfermedad cardíaca congénita, inmunodeficiencia o trastornos del sistema nervioso hereditario; (2) evidencia de coinfección con otros patógenos determinados por pruebas de ácido nucleico, cultivo de aspirados nasofaríngea, sangre, líquido de lavado alveolar o derrame pleural; (3) duración de la enfermedad de 4 semanas o más antes del ingreso hospitalario; (4) estancia en el hospital de menos de 3 días; (5) Inpletedad de los datos clínicos.
La broncoscopia se llevó a cabo en los casos en que la consolidación lobar o la atelectasia pulmonar no mostraron mejoras ni empeoradas a pesar de recibir el tratamiento apropiado de acuerdo con las pautas chinas para la bronquioscopia flexible pediátrica (2018) ((2018) (13).
Estudio anidado de casos-control
Los casos se definieron como pacientes que recibieron un diagnóstico de Pb confirmado por la observación de moldes de ramificación características durante la broncoscopia. El grupo de control estaba formado por individuos que, después de la broncoscopia, estaban decididos a no tener Pb. Cada caso se combinó con dos pacientes de control y dos controles sanos (HC) en función de los siguientes criterios: edad (dentro de ± 1 año), sexo y la duración desde el diagnóstico de Pb (dentro de ± 2 semanas). Este proceso de coincidencia se realizó a través de un muestreo aleatorio.
Recopilación de datos y mediciones de muestra
Los datos se recopilaron prospectivamente de los registros médicos de los pacientes inscritos. La información clínica abarcaba la edad, el sexo, la duración total de la fiebre, la duración de la fiebre antes de la hospitalización, el curso de la enfermedad en el momento de la broncoscopia, la duración de la estadía en el hospital y los gastos de hospitalización asociados. Los datos de laboratorio incluyeron recuentos de glóbulos blancos (WBC), recuentos de neutrófilos, niveles de proteína C reactiva (CRP), alanina transaminasa (ALT), aspartato transaminasa (AST), lactato deshidrogenasa (LDH) y evaluaciones de la función de coagulación. Además de ellas, se obtuvo una variedad de muestras biológicas, que comprendió una muestra de sangre tomada dentro de las 24 h de ingreso hospitalario, BALF y la vía aérea ramificada de pacientes diagnosticados con MPP.
Detección de muestras
Sangre y balf
Los niveles de NET en el plasma y BALF se midieron utilizando un kit de dsDNA de PicoGreen® Quant-IT (Invitrogen MA, EE. UU.) Y el kit ELISA MPO-ADN (Yobibio, China) siguiendo las pautas del fabricante. La cantidad de ADN se determinó en función de la intensidad de fluorescencia (480 y 520 nm) y la cantidad de ADN de MPO se determinó en función de la densidad óptica (OD) (450 nm).
Ramificación de vías respiratorias
Las muestras de fundición se trataron con paraformaldehído al 4% a temperatura ambiente durante 24 h, seguido de incrustación de parafina y tinción con hematoxilina y eosina. Para observar las redes en muestras de fundición, las secciones de tejido incrustadas en parafina se sometieron a tinción de inmunofluorescencia para redes. Las secciones se trataron con anticuerpos primarios dirigidos a MPO (1: 100, 60299–1 g, Proteintech) y CITH3 (1: 100, AB5103, ABCAM) durante la noche a 4 ° C. Después de eso, estuvieron expuestos a los anticuerpos secundarios correspondientes durante 2 ha temperatura ambiente y luego se mancharon con DAPI.
Las muestras de fundición bronquial recientemente recolectadas se fijaron inicialmente en una solución de glutaraldehído al 2.5%. Siguiendo los protocolos de deshidratación estándar y recubrimiento de pulverización, las muestras se examinaron para detectar redes y morfología de la superficie celular utilizando un microscopio electrónico de barrido (Hitachi SU8100), operado a un voltaje de aceleración de 3.0 kV.
Hacer un seguimiento
Los registros médicos electrónicos se utilizaron para compilar datos sobre encuentros ambulatorios e pacientes hospitalizados de pacientes pediátricos durante todo el período de seguimiento designado. Después de la descarga, los pacientes fueron sometidos a monitoreo semanal, y se evalúan las radiografías de tórax dependiendo de la condición clínica de cada individuo. La duración del período de seguimiento se delineó desde la fecha del diagnóstico de PB hasta la evaluación más reciente de las imágenes en el tórax. Los datos de seguimiento recopilados abarcaron varios parámetros, incluida la transferencia del paciente a la unidad de cuidados intensivos (UCI), la duración acumulada de las estadías en el hospital, los gastos del hospital, la incidencia de la neumonía necrotizante, la frecuencia de las intervenciones de broncoscopia y el tiempo transcurrido para la resolución de las anormalidades en las imágenes de los coferos. El tiempo para la recuperación de la imagen se definió como el intervalo desde el diagnóstico de Pb hasta el punto en el que grandes infiltrados en las radiografías de tórax ya no eran discernibles (10). Todos los datos de seguimiento estaban disponibles hasta el 10 de mayo de 2024.
Análisis estadístico
Los análisis estadísticos se realizaron utilizando el software SPSS 26.0 y GraphPad Prism 9.0. Los datos cuantitativos con asimetría se informaron como la mediana (rango intercuartil: percentiles 25-75) y se analizaron utilizando la prueba Wilcoxon-Mann-Whitney o la prueba Kruskal-Wallis, según corresponda. Los datos categóricos se expresaron como frecuencias y se analizaron utilizando la prueba de chi-cuadrado o la prueba exacta de Fisher, dependiendo del tamaño de la muestra. Las variables encontradas son significativas (p <0.05) en el análisis univariado se incluyeron posteriormente en una regresión logística multivariada ...
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