El incremento de las proporciones de células T de memoria PD-1+ CD4+ y de células T reguladoras PD-1+ se relaciona con una excelente respuesta a la prednisona en la sarcoidosis pulmonar


Resumen

Antecedentes

La respuesta al tratamiento con corticosteroides en pacientes con sarcoidosis es muy diversa. Las células T CD4+ juegan un papel crucial en el desarrollo de la sarcoidosis y su fenotipo en sangre periférica (PB) está relacionado con la evolución de la enfermedad. Planteamos la hipótesis de que el fenotipo de las células T circulantes en pacientes con sarcoidosis puede estar correlacionado con la respuesta al tratamiento con prednisona. Por lo tanto, nuestro objetivo fue correlacionar las frecuencias y los fenotipos de las células T circulantes al inicio del estudio con la respuesta de la función pulmonar a los 3 y 12 meses durante el tratamiento con prednisona en pacientes con sarcoidosis pulmonar.

Métodos

Empleamos citometría de flujo multicolor para cuantificar la expresión del marcador de activación en poblaciones de células T PB en 22 pacientes sin tratamiento previo y 21 controles sanos (HC). Se realizaron pruebas de función pulmonar al inicio, a los 3 y 12 meses para evaluar el efecto del tratamiento.

Resultados

Los pacientes con sarcoidosis evidenciaron un aumento absoluto en la capacidad vital forzada (FVC) del 14,2% predicho (± 10,6, p <0,0001) entre el inicio y los 3 meses. Se identificó una respuesta positiva a la prednisona (definida como un incremento absoluto de la FVC ≥ 10% del valor predicho) en 12 pacientes. Las células T de memoria CD4+ y las células T reguladoras de los pacientes con sarcoidosis presentaron un fenotipo anómalo al inicio del estudio, en comparación con los HC. Aquellos pacientes con una buena respuesta a los 3 meses mostraron aumentos significativos en las proporciones iniciales de células T de memoria PD-1+ CD4+ y células T reguladoras PD-1+, en contraste con los pacientes con una respuesta desfavorable y los HC. Además, la reducción de las fracciones de células CD25+ y el aumento de las fracciones de células PD-1+ dentro de la población de células T de memoria CD4+ estuvieron correlacionados con un incremento ≥ 10% de la FVC a los 12 meses. A lo largo del tratamiento, el fenotipo de las células de memoria y las células T reguladoras activadas de manera anómala experimentaron reversión.

Conclusiones

Las mayores proporciones de células T de memoria PD-1+ CD4+ circulantes y las células T reguladoras PD-1+, junto con las proporciones disminuidas de células T de memoria CD25+ CD4+, se relacionan con una óptima respuesta de la FVC a la prednisona en la sarcoidosis pulmonar, presentando así nuevos biomarcadores sanguíneos prometedores para la eficacia de la prednisona.

Registro de prueba

NL44805.078.13

Fondo

La sarcoidosis es una enfermedad granulomatosa que afecta varios órganos con una presentación variable. La mayoría de los pacientes experimentan compromiso pulmonar. La decisión de iniciar el tratamiento de la sarcoidosis se basa en la evaluación individual de la afectación orgánica progresiva o severa y la calidad de vida. Los glucocorticoides son la primera opción de tratamiento. Sin embargo, la respuesta a la prednisona varía considerablemente y algunos pacientes no responden al tratamiento. Estimar la respuesta a los glucocorticoides puede ser desafiante y el uso prolongado de prednisona puede tener efectos secundarios significativos. Por lo tanto, es crucial desarrollar biomarcadores que ayuden a predecir la respuesta terapéutica en la sarcoidosis.

En la sarcoidosis, la formación de granulomas resulta de una respuesta inmune excesiva a un antígeno no identificado en individuos genéticamente susceptibles. Se han postulado varios antígenos desencadenantes de la enfermedad que pueden desencadenar la cascada inflamatoria. La inmunología de las células T CD4+ ha demostrado ser fundamental para la evolución de la sarcoidosis. En pacientes con sarcoidosis, se han observado incrementos en las frecuencias de células T de memoria IL-17+ o IL-17+ IFNγ+ en el líquido de lavado broncoalveolar (BALF) y en los ganglios linfáticos mediastínicos (MLN). Además, se ha encontrado una activación anómala de las células T colaboradoras Th17 y las células T reguladoras, caracterizada por una disminución en la expresión del receptor inhibidor del antígeno 4 de los linfocitos T citotóxicos (CTLA4) en BALF y MLN. En pacientes con sarcoidosis progresiva, se han reportado mayores proporciones de células T CD4+ circulantes con expresión de PD-1 y un fenotipo agotado en comparación con pacientes con resolución de la enfermedad y HC. Además, durante la resolución de la sarcoidosis, las células T PD1+ CD4+ en sangre periférica disminuyen y se observa una normalización de la función inmune, indicando que los cambios fenotípicos y funcionales de las células T son reversibles. El tratamiento contra el cáncer con bloqueo de los puntos de control inmunológico anti-PD-1 o CTLA4 puede inducir una enfermedad similar a la sarcoidosis, lo que subraya la relación entre la activación anómala de las células T y la sarcoidosis.

La activación temprana de las células T CD4+ produce una regulación positiva del receptor de interleucina-2 (IL-2R) CD25. Posteriormente, CD25 se libera como IL-2R soluble (sIL2R), que puede usarse para evaluar la actividad de la sarcoidosis. Se ha demostrado correlación con las proporciones de células T CD4+ en BALF y la enfermedad aguda. Sin embargo, estudios múltiples no han logrado demostrar una correlación entre sIL2R y la función pulmonar, la progresión de la enfermedad o la respuesta al tratamiento con glucocorticoides. Por ende, a pesar de la evidencia contundente sobre la participación crítica de las células T en la sarcoidosis, sigue siendo desconocido si el fenotipo de las células T circulantes puede servir como biomarcador terapéutico en la sarcoidosis.

En este estudio, planteamos la hipótesis de que el fenotipo de las células T PB CD4+ de los pacientes con sarcoidosis podría correlacionarse con la respuesta al tratamiento con prednisona. Evaluamos las frecuencias y los fenotipos de las poblaciones de células T PB en pacientes recién diagnosticados con sarcoidosis pulmonar antes de iniciar el tratamiento con prednisona, así como en HC. Correlacionamos estos parámetros con la respuesta de la función pulmonar e investigamos el efecto del tratamiento con prednisona sobre las células T circulantes de los pacientes.

Métodos

Diseño del estudio y materias.

En este estudio multicéntrico prospectivo se incluyeron pacientes sin tratamiento previo con diagnóstico de sarcoidosis pulmonar según los criterios ATS/ERS/WASOG. Se obtuvo la aprobación ética del Centro Médico Erasmus y todos los participantes otorgaron su consentimiento informado. Anteriormente, habíamos informado sobre la respuesta a corto plazo en la espirometría hospitalaria y domiciliaria durante el tratamiento con prednisona en esta cohorte.

Todos los pacientes presentaban una capacidad vital forzada (FVC) inicial <85% y anomalías pulmonares parenquimatosas. El tratamiento con prednisona se estandarizó durante los primeros 3 meses, seguido de una dosis de mantenimiento. Se realizaron mediciones de la función pulmonar intrahospitalaria de la FVC y la capacidad de difusión de monóxido de carbono (DLCO) en varios momentos durante el estudio. Se tomaron muestras de sangre periférica para análisis inmunológicos en los mismos periodos. Se clasificaron a los pacientes según la respuesta pulmonar a los 3 meses en respuesta positiva y negativa, según criterios predefinidos.

Procesamiento de muestras y citometría de flujo.

Se recolectaron muestras de sangre en tubos con EDTA y se obtuvieron células mononucleares PB (PBMC) mediante separación por densidad de Ficoll y se almacenaron a -180 °C. Los análisis de citometría de flujo se realizaron siguiendo los procedimientos estándar.

Los archivos de citometría de flujo obtenidos se preprocesaron y se llevó a cabo un control de calidad para garantizar la precisión de los datos. Los archivos limpios se analizaron utilizando software especializado y se excluyeron las muestras de baja calidad. Se calcularon los valores relevantes a partir de las fracciones seleccionadas.

Análisis estadístico

Los análisis estadísticos se efectuaron con software específico, utilizando pruebas adecuadas para comparar las variables continuas entre diferentes momentos temporales y entre grupos. Se consideraron significativos los valores de p <0,05 y se representaron visualmente en los gráficos.

Resultados

En este estudio, se reclutaron 25 pacientes con sarcoidosis pulmonar, de los cuales tres fueron excluidos del análisis. No se incluyeron pacientes con síndrome de Löfgren. Las características demográficas y clínicas iniciales se detallan en la tabla de Características basales de los participantes.

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